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【造血干细胞存储】​细胞分化功能检验

2024-03-12 15:10:14


(1)成脂诱导分化:

1)诱导方法:收集待检的 hUCMSO,按照1×103cm2接种到12孔板中静置培养,至到细胞100%甚至过度融合时,吸去10%FBS的 DMEM/F12培养基,加入成脂分化诱导培养液,每3天换液1次,诱导培养14天后,4%多聚甲醛固定30分钟后染色,显微镜下观察拍照。

2)检测方法(油红0染色)成脂肪诱导的过程中,造血干细胞存储细胞在胞质中不断有滴的累积,并不断的增加变大,zui后整个细胞的胞质中都是油滴。油红O染色的方法是对油滴的染色的一种方法。

造血干细胞存储细胞

(2)成骨诱导分化

1)诱导方法:收集待检的 hUCMSC,按照5×101m2接种到12孔板中静置培养,至细胞60%~70%融合状态时,吸去10%FBS的 DMEMF2培养基,加入成骨分化诱导培养液,每3天换液1次,诱导培养21天后,4%多聚甲醛固定30分钟后染色,显微镜下观察拍照。

2)检测方法:(茜素红染色)成骨诱导过程中钙离子以钙盐的方式沉淀下来,形成“钙结节”,造血干细胞存储细胞茜素红和钙发生显色反应,产生一种深红色的带色化合物,这样成骨诱导的细胞外沉积的钙结节也就被染成深红色。

(3)成软骨诱导分化:

1)诱导方法:收集待检的 hUCMSC,调整细胞浓度为1.6×107ml,造血干细胞存储细胞取5山接种12孔板中,静置于37℃,5%CO2培养箱中培养2小时,缓慢加入成软骨分化培养基静置培养,每3天换液1次,培养14天后,4%多聚甲醛固定、石蜡包埋软骨小球病理切片,脱蜡后染色,显微镜下观察拍照。

2)检测方法:(阿利辛蓝染色)检测软骨细胞分泌基质中的葡萄糖胺聚糖,可使软骨中硫酸软骨素、硫酸胶质素等主要成分呈现蓝色。


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